那首先提到对细胞库稳定性研究的法规有以下几个：

（1）2007.08.13-重组制品生产用哺乳动物细胞质量控制技术评价一般原则，提到传代稳定性研究中需要对基因水平进行研究，但未提及方法学验证

【6.2 传代/扩增过程中的稳定性  应对库细胞和生产过程细胞进行传代/扩增的稳定性研究，......，至少应包括以下方面的试验研究：6.2.1 基因水平的比较目的基因编码序列和表达框架不应有错误，包括突变、缺失、插入。并注意比较基因拷贝数的变化。】

（2）ICH Q5D，【对于含有重组DNA表达载体的细胞系，在其培养达到或超过体外代次限度时，应按ICH有关指南中的方法，通过核酸检测或产品分析，对表达载体上编码序列的一致性进行验证。】当然这里提及的是编码序列一致性的验证，但同步去了解了一下“CH有关指南中的方法”，应该指的是ICH Q5B 源自重组DNA技术的蛋白质产品的表达载体分析。

（3）ICH Q5B，【为确认序列的目的所使用的各种分析方法，应予以验证，验证文件至少应包括对各变异序列的检测限度的估测。对核酸或蛋白测序方法都应作这样的验证评价。】←这个ICH指导原则，可以再看下是否适用于自己的产品。

其他一些和核查相关的法规，例如：

（1）2016年的江苏省食品药品监督管理局药品注册研制现场核查要点（治疗类生物制品），【1.8细胞库的关注点：原始细胞库明确转染方法、挑选克隆的标准、最终要挑选出的单克隆建库；描述主细胞库和工作细胞库构建过程（传代代数、保存支数、保存条件）；描述各级细胞库的培养方法（明确使用的培养基、应描述无血清驯化过程）。

传代稳定性：模拟真实生产条件进行传代培养（如去除选择压力）、稳定性考察项目包括细胞复苏存活率、细胞内质粒拷贝数、细胞自身的稳定性（如细胞的形态、生长、代谢、遗传特征等）、蛋白表达量、表达蛋白性质、致瘤性、宿主细胞种属性研究等。根据传代稳定性研究，确定工作细胞的最高限传代次。】，但没有强调对检测方法验证的关注。

在查阅国外相关法规时其他收获：（1）EMA：Productionand quality control of medicinal products derived by recombinant DNA technology - Scientific guideline，但这个法规较老旧，同时 It has been superseded by ICH Q5B, ICH Q5D and ICH Q6B.

不过在该法规提到 可以考虑在蛋白质和/或 DNA 水平上进行分析。无论使用哪种方法，都应进行验证并给出检测限。

【Stability of the expression system

Stability studies should also provide detailed information on: i ) gene copy number in relation to productivity of the culture, ii) deletions and/or insertions affecting any part of the expression vectoriii) the protein produced.

For this purpose, analysis should be performed in such a way that the results can confirm that the number of variants is below an acceptable limit to be established on a case by case basis depending on the nature and proposed use of the product. Analysis at the protein and/or at the DNA level can be envisaged. Whichever method is used, it should be validated and the detection limit given.】

 ——综上所述，个人感觉，ICH好像是要求做验证的，但我也实际去问过好些同行。基本都是委外，也没有去探究委托机构是否做验证，对这部分工作好像没有很关注。

——我也猜测，如果方法+检测设备本身，不需要因为样本原因做针对性的验证。例如检测设备做好各类设备验证，样品只需要上样，就能稳定出结果的话，那也可能委外机构也不会给每家产品做额外的验证了？期待相关专业老师的解答~

——但我觉得无论怎么说，都是希望检测得到的数据可靠、具有“指导”意义，如果方法变异度很大，那出于风险，验证可能也是必要的。

——当然了，如果是药典方法，确认即可。

——以上~ 希望有所帮助~

在FDA的IND申报项目中，被要求提供过细胞库库检定方法的详细资料，包括声明哪些方法是USP药典方法，哪些是ChP等国家药典方法，哪些是非药典方法；对于非药典方法，需要提供详细的方法描述、对照的设置以及方法灵敏度和专属性信息(the assay sensitivity and specificity)。

当时答复FDA是提供了第三方检测机构的方法验证总结的。

传代稳定性研究的方法一般是与检定的方法相同的，我认为也是需要进行方法验证的，验证的程度可以评估讨论。背后的原因很明确，只有方法被证明是满足检测目的，其检测数据才是可信的，尤其是稳定性研究这种多个取样点的对比数据，如果方法学都不稳健，产生的数据不可靠不说，还可能出OOS/OOT等非常棘手的问题。

在进行细胞传代稳定性，主要是考察随着传代次数的增加，细胞可能出现一些不稳定性，如形态发生变化，生长和代谢速度变缓，遗传特征发生变化，或成瘤性增强等。根据既往申报经验，有些检测会公司内的平台已经在其他产品进行相关qPCR准确度验证和拟申报产品的分析方法中的检测项中涵盖，不需要另行提供。