超大分子的分子量通常超过数百KD,比如病毒、VLP、病毒载体、IgM 等。
图1 常见分子大小示意图(图片来自网络)
无论在科研还是制药行业,获得足够量、高纯度的样品是必备操作。以可溶性样品为例,常用分离纯化手段包括离心、膜过滤、层析等。其中,分辨率最高、分离原理最丰富的当属层析技术。根据层析原理的不同,分为凝胶过滤层析、离子交换层析、疏水层析、亲和层析、多模式层析。根据目的分子和杂质的最大区别点,选择相应的层析填料,可以事半功倍。
以293T细胞培养为例,绝大部分宿主蛋白和宿主核酸等杂质的分子量在100KD以下,因此,与病毒有数倍的分子量差异,可以使用凝胶过滤层析填料进行分离:病毒在外水出峰,杂质在内水出峰,从而实现完美分离。
图2 纯化流感病毒图谱
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老师,您的图是裂开的……能不能重新上传一下?